指導(dǎo)原則編號(hào)： 【 H 】 G C L 2 - 1

                                                   二○○五年三月

            目 錄

一、概述···················································································································································1

二、生物利用度和生物等效性基本概念及應(yīng)用·····························································2

三、生物利用度和生物等效性研究方法··············································································4

四、生物利用度和生物等效性研究具體要求···································································6

（一）生物樣本分析方法的建立和確證·····································································6

（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作·········································································································11

（三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析······························································································17

（四）結(jié)果的評(píng)價(jià)···················································································································20

（五）臨床報(bào)告內(nèi)容··············································································································21

五、特殊制劑······································································································································22

（一）口服緩控釋制劑········································································································22

（二）特殊活性成分制劑···································································································24

（三）復(fù)方制劑························································································································25

六、結(jié)語(yǔ)················································································································································25

七、名詞解釋······································································································································25

八、參考文獻(xiàn)·····································································································································26

九、著者················································································································································28

一、概述

藥物制劑要產(chǎn)生最佳療效，其藥物活性成分應(yīng)當(dāng)在預(yù)期時(shí)間段內(nèi)釋放吸收并被轉(zhuǎn)運(yùn)到作用部位達(dá)到預(yù)期的有效濃度。大多數(shù)藥物是進(jìn)入血液循環(huán)后產(chǎn)生全身治療效果的，作用部位的藥物濃度和血液中藥物濃度存在一定的比例關(guān)系，因此可以通過(guò)測(cè)定血液循環(huán)中的藥物濃度來(lái)獲得反映藥物體內(nèi)吸收程度和速度的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，間接預(yù)測(cè)藥物制劑的臨床治療效果，以評(píng)價(jià)制劑的質(zhì)量。允許這種預(yù)測(cè)的前提是制劑中活性成分進(jìn)入體內(nèi)的行為是一致并且可重現(xiàn)的。

生物利用度（Bioavailability BA）是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。過(guò)去出現(xiàn)的一些由于制劑生物利用度不同而導(dǎo)致的不良事件，使人們認(rèn)識(shí)到確有必要對(duì)制劑中活性成分生物利用度的一致性或可重現(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn)證，尤其是在含有相同活性成分的仿制產(chǎn)品要替代它的原創(chuàng)制劑進(jìn)入臨床使用的時(shí)候。鑒于藥物濃度和治療效果相關(guān)，假設(shè)在同一受試者，相同的血藥濃度-時(shí)間曲線意味著在作用部位能達(dá)到相同的藥物濃度，并產(chǎn)生相同的療效，那么就可以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)作為替代的終點(diǎn)指標(biāo)來(lái)建立等效性，即生物等效性（Bioequivalence BE）。

BA 和 BE 研究已經(jīng)成為評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要手段。本指導(dǎo)原則將重點(diǎn)闡述 BA 和 BE 研究的相關(guān)概念，應(yīng)用范圍和 BA 和 BE 研究的設(shè)計(jì)、操作和評(píng)價(jià)等。

本指導(dǎo)原則主要是針對(duì)化學(xué)藥品口服制劑的 BA 和 BE 研究，也適用于其他需要吸收起全身作用的化學(xué)藥品制劑。因?yàn)樵诰唧w應(yīng)用過(guò)程中有可能面臨多種情況，對(duì)于一些特殊問(wèn)題，仍應(yīng)遵循具體問(wèn)題具體分析的原則。

二、BA 和 BE 基本概念及應(yīng)用

1. 生物利用度：是指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度。一般分為絕對(duì)生物利用度和相對(duì)生物利用度。絕對(duì)生物利用度是以靜脈制劑（通常認(rèn)為靜脈制劑生物利用度為 100%）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對(duì)量；相對(duì)生物利用度則是以其他非靜脈途徑給藥的制劑（如片劑和口服溶液）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對(duì)量，

2. 生物等效性：是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗(yàn)條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通常意義的 BE 研究是指用 BA 研究方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。在藥代動(dòng)力學(xué)方法確實(shí)不可行時(shí), 也可以考慮以臨床綜合療效、藥效學(xué)指標(biāo)或體外試驗(yàn)指標(biāo)等進(jìn)行比較性研究，但需充分證實(shí)所采用的方法具有科學(xué)性和可行性。

了解以下幾個(gè)概念將有助于理解 BA 和 BE：

原創(chuàng)藥（Innovator Product）：是指已經(jīng)過(guò)全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。

藥學(xué)等效性(Pharmaceutical equivalence)：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則可以認(rèn)為他們是藥學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效，因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等可能會(huì)導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變。

        治療等效性(Therapeutic equivalence)：如果兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。如果兩制劑中所用輔料本身并不會(huì)導(dǎo)致有效性和安全性問(wèn)題，生物等效性研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。如果藥物吸收速度與臨床療效無(wú)關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如某一化合物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效。

基本相似藥物（Essentially similar product）：如果兩個(gè)制劑具有等量且符合同一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥物活性成分，具有相同劑型，并且經(jīng)過(guò)證明具有生物等效性,則兩個(gè)制劑可以認(rèn)為是基本相似藥物。從廣義上講，這一概念也應(yīng)適用于含同一活性成分的不同的劑型，如片劑和膠囊劑。與原創(chuàng)藥基本相似藥物是可以替換原創(chuàng)藥使用的。

BA 和 BE 均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，BA 強(qiáng)調(diào)反映藥物活性成分

到達(dá)體內(nèi)循環(huán)的相對(duì)量和速度，是新藥研究過(guò)程中選擇合適給藥途徑和確

定用藥方案(如給藥劑量和給藥間隔)的重要依據(jù)之一。BE 則重點(diǎn)在于以預(yù)

先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同

制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使

用的依據(jù)。

BA 和 BE 研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：

在新藥研究階段，為了確定新藥處方、工藝合理性，通常需要比較改

變上述因素后制劑是否能達(dá)到預(yù)期的生物利用度；開(kāi)發(fā)了新劑型，要對(duì)擬

上市劑型進(jìn)行生物利用度研究以確定劑型的合理性，通過(guò)與原劑型比較的

BA 研究來(lái)確定新劑型的給藥劑量，也可通過(guò) BE 研究來(lái)證實(shí)新劑型與原劑

型是否等效；在臨床試驗(yàn)過(guò)程中，可通過(guò) BE 研究來(lái)驗(yàn)證同一藥物的不同

時(shí)期產(chǎn)品的前后一致性，如：早期和晚期的臨床試驗(yàn)用藥品，臨床試驗(yàn)用

藥品（尤其是用于確定劑量的試驗(yàn)藥）和擬上市藥品等。

在仿制生產(chǎn)已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)藥品時(shí)，可通過(guò) BE 研究來(lái)證明仿制產(chǎn)品與

原創(chuàng)藥是否具有生物等效性，是否可與原創(chuàng)藥替換使用。

藥品批準(zhǔn)上市后，如處方組成成分、比例以及工藝等出現(xiàn)一定程度的

變更時(shí)，研究者需要根據(jù)產(chǎn)品變化的程度來(lái)確定是否進(jìn)行 BE 研究，以考

察變更后和變更前產(chǎn)品是否具有生物等效性。以提高生物利用度為目的研

發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行 BA 研究，了解變更前后生物利用度的變化。

三、研究方法

BE 研究是在試驗(yàn)制劑和參比制劑生物利用度比較基礎(chǔ)上建立等效性，

BA 研究多數(shù)也是比較性研究，兩者的研究方法與步驟基本一致，只是研究

目的不同，導(dǎo)致在某些設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)上有一些不同，故在這部分主要闡述 BE

研究方法，該方法同樣適合于 BA 研究，建議研究者根據(jù)產(chǎn)品研究目的來(lái)

進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

目前推薦的生物等效性研究方法包括體內(nèi)和體外的方法。按方法的優(yōu)

先考慮程度從高到低排列：藥代動(dòng)力學(xué)研究方法、藥效動(dòng)力學(xué)研究方法、

臨床比較試驗(yàn)方法、體外研究方法。具體如下：

藥代動(dòng)力學(xué)研究

即采用人體生物利用度比較研究的方法。通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的生物

 樣本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時(shí)間曲線

（Concentration-Time curve,C-T）來(lái)反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的

動(dòng)態(tài)過(guò)程。并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)

參數(shù)如曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等，通

過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較以上參數(shù)，判斷兩制劑是否生物等效。藥效動(dòng)力學(xué)研究在無(wú)

可行的藥代動(dòng)力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時(shí)（如無(wú)靈敏的血藥濃度

檢測(cè)方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確的可分級(jí)定

量的人體藥效學(xué)指標(biāo)通過(guò)效應(yīng)-時(shí)間曲線（Effect-Time curve）與參比制劑比

較來(lái)確定生物等效性。

臨床比較試驗(yàn)

當(dāng)無(wú)適宜的藥物濃度檢測(cè)方法，也缺乏明確的藥效學(xué)指標(biāo)時(shí)，也可以

通過(guò)以參比制劑為對(duì)照的臨床比較試驗(yàn)，以綜合的療效終點(diǎn)指標(biāo)來(lái)驗(yàn)證兩

制劑的等效性。然而，作為生物等效研究方法，對(duì)照的臨床試驗(yàn)可能因?yàn)?/span>

樣本量不足或檢測(cè)指標(biāo)不靈敏而缺乏足夠的把握度去檢驗(yàn)差異，故建議盡

量采用藥代動(dòng)力學(xué)研究方法。通過(guò)增加樣本量或嚴(yán)格的臨床研究實(shí)施在一

定程度上可以克服以上局限。

體外研究

一般不提倡用體外的方法來(lái)確定生物等效性，因?yàn)轶w外并不能完全代

替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分依據(jù)，也可以采用體外的方

法來(lái)證實(shí)生物等效性。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類證明屬于高溶解度，高滲透性，

快速溶出的口服制劑可以采用體外溶出度比較研究的方法驗(yàn)證生物等效，

因?yàn)樵擃愃幬锏娜艹�、吸收已�?jīng)不是藥物進(jìn)入體內(nèi)的限速步驟。對(duì)于難溶

性但高滲透性的藥物，如已建立良好的體內(nèi)外相關(guān)關(guān)系，也可用體外溶出

的研究來(lái)替代體內(nèi)研究。

四、BA 和 BE 研究具體要求

以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效

性研究方法。一個(gè)完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、

統(tǒng)計(jì)分析、結(jié)果評(píng)價(jià)四個(gè)方面內(nèi)容。

（一）生物樣本分析方法的建立和確證

生物樣品一般來(lái)自全血、血清、血漿、尿液或其他組織，具有取樣量

少、藥物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個(gè)體的差異大等特點(diǎn)，因此必須根據(jù)待

測(cè)物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品定量分析

方法，并對(duì)方法進(jìn)行確證。

1. 常用分析方法

目前常用的幾種分析方法有：

（1）色譜法：氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、色譜－質(zhì)譜

聯(lián)用法（LC－MS、LC-MS-MS、GC-MS、GC-MS-MS）等，可用于大多數(shù)藥

物的檢測(cè)；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫

分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測(cè)；（3）微生物學(xué)方法，可用于抗

生素藥物的測(cè)定。

生物樣本分析方法的選擇宜盡量選擇可行的靈敏度高的方法。

2. 方法學(xué)確證（Method Validation）

建立可靠的和可重現(xiàn)的定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵之

一。為了保證分析方法可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行以下

幾方面的考察：

2.1 特異性(Specificity)

特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一

地測(cè)定分析物的能力。必須提供證明所測(cè)定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或

特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物不得

干擾對(duì)樣品的測(cè)定，如果有幾個(gè)分析物，應(yīng)保證每一個(gè)分析物都不被干擾。

應(yīng)確定保證分析方法特異性的最佳檢測(cè)條件。對(duì)于色譜法至少要考察 6 個(gè)

來(lái)自不同個(gè)體的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖

（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖反映分析方法的特異性。對(duì)于以軟

電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測(cè)法（LC－MS、LC-MS-MS）應(yīng)注意考察分析過(guò)程中

的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（Calibration Curve）

標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測(cè)定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回

歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）所得的回歸方程來(lái)評(píng)價(jià)。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)

曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說(shuō)明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范

圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測(cè)定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)

確度。

配制標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同生物介質(zhì)，不同生物樣品應(yīng)制備

各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個(gè)數(shù)取決于分析物可能的

濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。必須至少用 6 個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，

對(duì)于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)的生物

樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)

準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)，僅用于評(píng)價(jià)干擾。

標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)的實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值之間的偏差^*在可接受的范圍之內(nèi)時(shí)，

可判定標(biāo)準(zhǔn)曲線合格。可接受范圍一般規(guī)定為最低濃度點(diǎn)的偏差在±20%

以內(nèi)，其余濃度點(diǎn)的偏差在±15%以內(nèi)。只有合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對(duì)臨床

待測(cè)樣品進(jìn)行定量計(jì)算。當(dāng)線性范圍較寬的時(shí)候，推薦采用加權(quán)的方法對(duì)

標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，以使低濃度點(diǎn)計(jì)算得比較準(zhǔn)確。

2.3 定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ）

定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示測(cè)定樣品中符合準(zhǔn)確度和

精密度要求的最低藥物濃度。LLOQ 應(yīng)能滿足測(cè)定 3～5 個(gè)消除半衰期時(shí)樣

品中的藥物濃度或能檢測(cè)出 Cmax 的 1／10～1／20 時(shí)的藥物濃度。其準(zhǔn)確

度應(yīng)在真實(shí)濃度的 80%～120%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)應(yīng)小于 20%。應(yīng)至

少由 5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。

2.4 精密度與準(zhǔn)確度(Prcision  and  Accuracy)

精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列

測(cè)量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間 RSD 來(lái)考察方法的精確

度。一般 RSD 應(yīng)小于 15％，在 LLOQ 附近 RSD 應(yīng)小于 20％。

準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測(cè)得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的

接近程度(即質(zhì)控樣品的實(shí)測(cè)濃度與真實(shí)濃度的偏差)，重復(fù)測(cè)定已知濃度分

析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng) 85％～115％范圍內(nèi)，在 LLOQ 附近應(yīng)在

80％～120％范圍內(nèi)。

一般要求選擇高、中、低 3 個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度

^*  ：偏差=【（實(shí)測(cè)值－標(biāo)示值）/標(biāo)示值】X100%

和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在 LLOQ 的 3 倍以內(nèi)，高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線

的上限，中間選一個(gè)濃度。在測(cè)定批內(nèi)精密度時(shí)，每一濃度至少制備并測(cè)

定 5 個(gè)樣品。為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測(cè)定 3 個(gè)合格

的分析批(Analytical run/Analytical batch)，至少 45 個(gè)樣品。

2.5 樣品穩(wěn)定性(Stability)

根據(jù)具體情況，對(duì)含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同

存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。還應(yīng)注意

考察儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性，以保證檢

測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

2.6 提取回收率

從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響

應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說(shuō)是將供試生物樣品中分析物提取

出來(lái)供分析的比例。應(yīng)考察高、中、低 3 個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)

當(dāng)精密和可重現(xiàn)。

2.7 微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證

上述分析方法確證主要針對(duì)色譜法，很多參數(shù)和原則也適用于微生物

學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物

學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的，所以應(yīng)盡可能采用比化學(xué)

分析更多的濃度點(diǎn)來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素，如果重

復(fù)測(cè)定能夠改善準(zhǔn)確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測(cè)定中采用同樣的步

驟。

3. 方法學(xué)質(zhì)控

只有在生物樣本分析方法確證完成之后才能開(kāi)始測(cè)定未知樣品。在測(cè)定生物樣品中的藥物濃度時(shí)應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實(shí)際應(yīng)用中的可靠性。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對(duì)分析方法進(jìn)行考核。

每個(gè)未知樣品一般測(cè)定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。生物等效性試驗(yàn)中，來(lái)自同一個(gè)體的生物樣品最好在同一批中測(cè)定。每個(gè)分析批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。每個(gè)濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中。當(dāng)一個(gè)分析批中未知樣品數(shù)目較多時(shí)，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的 5%。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于 15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于 20%，最多允許 1/3 的質(zhì)控樣品結(jié)果超過(guò)上述限度，但不能出現(xiàn)在同一濃度質(zhì)控樣品中。如質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測(cè)試結(jié)果作廢。

濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測(cè)定。對(duì)于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析時(shí)，在達(dá)到 Cmax

以前取樣的樣品應(yīng)以零值計(jì)算，在達(dá)到 Cmax 以后取樣的樣品應(yīng)以無(wú)法定量（Not detectable, ND）計(jì)算，以減小零值對(duì) AUC 計(jì)算的影響。

4 分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

分析方法的有效性應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明。在臨床報(bào)告中，應(yīng)提供完成這些

實(shí)驗(yàn)工作的相關(guān)的詳細(xì)資料。建立一般性和特殊性標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、保存完

整的實(shí)驗(yàn)記錄是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中產(chǎn)生的

數(shù)據(jù)和質(zhì)控樣品測(cè)試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，并提供足夠的可供評(píng)價(jià)

的方法學(xué)建立和樣品分析的數(shù)據(jù)。

至少應(yīng)當(dāng)提供的數(shù)據(jù)包括：

4.1 方法建立的數(shù)據(jù)

分析方法的詳細(xì)描述；儀器設(shè)備、分析條件；該方法所用對(duì)照品（被

測(cè)藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來(lái)源；描述測(cè)定特異性、準(zhǔn)確度、精

密度、回收率、定量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)并給出獲得的主要數(shù)據(jù)列表；列

出批內(nèi)批間精密度和準(zhǔn)確度的詳細(xì)結(jié)果；描述穩(wěn)定性考察及相關(guān)數(shù)據(jù)；根

據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說(shuō)明。

4.2 樣品分析的數(shù)據(jù)

樣品處理和保存的情況；分析樣品時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線列表；用于計(jì)算結(jié)果的

回歸方程；各分析批質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果綜合列表并計(jì)算批內(nèi)和批間精密度、

準(zhǔn)確度；各分析批包括的未知樣品濃度計(jì)算結(jié)果。

提供 20%受試者樣品測(cè)試的色譜圖復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲

線和質(zhì)控樣品的色譜圖復(fù)印件。

注明缺失樣品的原因，重復(fù)測(cè)試的結(jié)果。對(duì)舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇

所報(bào)告的數(shù)據(jù)說(shuō)明理由。

4.3 其他相關(guān)信息

項(xiàng)目編號(hào)、分析方法編號(hào)、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡(jiǎn)化的

理由、以及相應(yīng)的項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)、標(biāo)題等。

（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作

1. 交叉設(shè)計(jì)

交叉設(shè)計(jì)是目前應(yīng)用最多最廣的方法，因?yàn)槎鄶?shù)藥物吸收和清除在個(gè) 

體之間均存在很大變異，個(gè)體間的變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)，因此生物等效性研究一般要求按自身交叉對(duì)照的方法設(shè)計(jì)。把受試對(duì)象隨機(jī)分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長(zhǎng)的間隔時(shí)間，為清洗期（Wash-out Period）。這樣，對(duì)每位受試者都連續(xù)接受兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對(duì)照，可以將制劑因素對(duì)藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開(kāi)來(lái)，減少了不同試驗(yàn)周期和個(gè)體間差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

根據(jù)試驗(yàn)制劑數(shù)量不同一般采用 2×2 交叉、3×3 交叉等設(shè)計(jì)。如果是兩種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計(jì)是較好的選擇。如試驗(yàn)包括 3 個(gè)制劑（受試制劑 2 個(gè)和參比制劑 1 個(gè)）時(shí)，宜采用 3 制劑 3 周

期二重 3×3 拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)。各周期間也應(yīng)有足夠的清洗期。

設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個(gè)周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于 7 個(gè)消除半衰期。

但有些藥物或其活性代謝物半衰期很長(zhǎng)時(shí)則難以按此方法設(shè)計(jì)實(shí)施，在此情況下可能需要考慮按平行組設(shè)計(jì)進(jìn)行，但樣本量可能要增加。

而對(duì)于某些高變異性藥物（Highly Variable Drug），根據(jù)具體情況，除采用增加例數(shù)的辦法外，可采用重復(fù)交叉設(shè)計(jì),對(duì)同一受試者兩次接受同一制劑時(shí)可能存在的個(gè)體內(nèi)差異進(jìn)行測(cè)定。

2. 受試者的選擇

2.1 受試者入選條件：

受試者的選擇應(yīng)當(dāng)盡量使個(gè)體間差異減到最小，以便能檢測(cè)出制劑間

的差異。試驗(yàn)方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。

一般情況應(yīng)選擇男性健康受試者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情

況選擇適當(dāng)受試者。選擇健康女性受試者應(yīng)避免懷孕的可能性。如待測(cè)藥

物存在已知的不良反應(yīng)，可能帶來(lái)安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受

試者。

年齡:一般 18～40 周歲，同一批受試者年齡不宜相差 10 歲以上。

體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于 50kg。按體質(zhì)指數(shù)(Body Mass

Index , BMI)＝體重（kg）／身高 ²（m²）計(jì)算，一般應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重范圍內(nèi)。

同一批受試者體重（kg）不宜懸殊過(guò)大，因?yàn)槭茉囌叻�用的藥物劑量是相同的�?/span>

受試者應(yīng)經(jīng)過(guò)全面體檢，身體健康，無(wú)心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無(wú)異常，避免藥物體內(nèi)過(guò)程受到疾病干擾。根據(jù)藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗(yàn)前、試驗(yàn)期間、試驗(yàn)后進(jìn)行特殊項(xiàng)目檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。

為避免其他藥物干擾，試驗(yàn)前兩周內(nèi)及試驗(yàn)期間禁服任何其他藥物。實(shí)驗(yàn)期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以免干擾藥物體內(nèi)代謝。受試者應(yīng)無(wú)煙、酒嗜好。如有吸煙史，在討論結(jié)果時(shí)應(yīng)考慮可能的影響。

如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致代謝差異，應(yīng)考慮受試者由于慢代謝可能出現(xiàn)的安全性等問(wèn)題。

2.2 受試者例數(shù)

受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，對(duì)于目前的統(tǒng)計(jì)方法,18-24 例可滿足

大多數(shù)藥物對(duì)樣本量的要求，但對(duì)某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加

例數(shù)。

一個(gè)臨床試驗(yàn)的例數(shù)多少是由三個(gè)基本因素決定的：（1）顯著性水平：

即 α 值的大小，通常取 0.05 或 5%；（2）把握度：即 1-β 值的大小，一般

定為不小于 80%，其中 β 是犯第Ⅱ類錯(cuò)誤的概率，也就是把實(shí)際有效誤判

為無(wú)效的概率；（3）變異性（CV%）和差別（θ ）：兩藥等效性檢驗(yàn)中檢測(cè)

指標(biāo)的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。在試驗(yàn)前并不知道 θ 和 CV%，

只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來(lái)估算或進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。另外，當(dāng)一個(gè)

生物利用度試驗(yàn)完成后，可以根據(jù) θ 、CV%和把握度等參數(shù)來(lái)求 N 值，并

與試驗(yàn)所選擇例數(shù)進(jìn)行對(duì)比，檢驗(yàn)試驗(yàn)所采用例數(shù)是否合適。

2.3 受試者分組

必須采用隨機(jī)方法分組，各組間應(yīng)具有可比性。

3. 受試制劑和參比制劑(Test Product and Reference Product ,T and R )

參比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，一般應(yīng)選擇

國(guó)內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市相同劑型藥物中的原創(chuàng)藥。在無(wú)法獲得原創(chuàng)藥時(shí)，可考

慮選用上市主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑，但須提供相關(guān)質(zhì)量證明（如含量、溶

出度等檢查結(jié)果）及選擇理由。若為完成特定研究目的，可選用相同藥物

的其它藥劑學(xué)性質(zhì)相近的上市劑型作為參比制劑，這類參比制劑亦應(yīng)該是

已上市的且質(zhì)量合格的產(chǎn)品。參比制劑和受試制劑含量差別不能超過(guò) 5%。

對(duì)于受試制劑，應(yīng)為符合臨床應(yīng)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中試/生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。

應(yīng)提供該制劑的體外溶出度、穩(wěn)定性、含量或效價(jià)測(cè)定、批間一致性報(bào)告

等，供試驗(yàn)單位參考。個(gè)別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構(gòu)體的資料。

參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號(hào)、規(guī)格、保存條件、有

效期。

試驗(yàn)結(jié)束后受試制劑和參比制劑應(yīng)保留足夠長(zhǎng)時(shí)間直到產(chǎn)品批準(zhǔn)上市

以備查。

4. 給藥劑量

進(jìn)行藥物制劑生物利用度和生物等效性研究時(shí)，給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過(guò)臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量，需要使用不相等劑量時(shí)，應(yīng)說(shuō)明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動(dòng)力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計(jì)算生物利用度。

一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可,但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測(cè)定血藥濃度時(shí)；（2）受試藥的生物利用度有較大個(gè)體差異；（3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（4）緩控釋制劑。進(jìn)行多次給藥研究應(yīng)按臨床推薦的給藥方案給藥，至少連續(xù) 3 次測(cè)定谷濃度確定血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后選擇一個(gè)給藥間隔取樣進(jìn)行測(cè)定，并據(jù)此計(jì)算生物利用度。

5. 取樣

取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)對(duì)保證試驗(yàn)結(jié)果可靠性及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算的合理

性，均有十分重要的意義。通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)或參考國(guó)內(nèi)外的藥代文獻(xiàn)，為

合理設(shè)計(jì)采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血藥濃度測(cè)定法時(shí)，一般應(yīng)兼顧到吸收相、

平衡相（峰濃度）和消除相。在藥物濃度—時(shí)間曲線各時(shí)相及預(yù)計(jì)達(dá)峰時(shí)

間前后應(yīng)有足夠采樣點(diǎn)，使?jié)舛?/span>—時(shí)間曲線能全面反應(yīng)藥物在體內(nèi)處置的

全過(guò)程。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取 2-3 個(gè)點(diǎn)，峰濃度附

近至少需要 3 個(gè)點(diǎn)，消除相取 3-5 個(gè)點(diǎn)。盡量避免第一個(gè)點(diǎn)即為 Cmax，預(yù)

試驗(yàn)將有助于避免這個(gè)問(wèn)題。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性代謝物 3～5

個(gè)半衰期時(shí)，或至血藥濃度為 Cmax 的 1／10～1／20,AUC_0-t/AUC_0-∞通常應(yīng)當(dāng)大于 80%。對(duì)于長(zhǎng)半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過(guò)程，因?yàn)槟┒讼�除�?xiàng)對(duì)該類制劑吸收過(guò)程的評(píng)價(jià)影響不大。多次給藥研究中，對(duì)于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應(yīng)該連續(xù) 24

小時(shí)取樣。

當(dāng)受試藥不能用血藥濃度測(cè)定方法進(jìn)行生物利用度檢測(cè)時(shí)，若該藥原形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的 70%），可以考慮尿藥法測(cè)定，以尿樣中藥物的累積排泄量來(lái)反映藥物攝入量。試驗(yàn)藥品和試驗(yàn)方案應(yīng)當(dāng)符合生物利用度測(cè)定要求。尿樣的收集采用分段收集法,其采集頻度、間隔時(shí)間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝物經(jīng)尿的排泄程度。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。

某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無(wú)法測(cè)定生物樣品中原形藥物，也可采用測(cè)定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗(yàn)。

6. 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算

一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來(lái)估算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。用房室模型

方法估算藥代參數(shù)時(shí)，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。研究

者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報(bào)告中注

明所用軟件。在生物等效性研究中，其主要測(cè)量參數(shù) Cmax 和 Tmax 均以實(shí)

測(cè)值表示。AUC0→t 以梯形法計(jì)算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。

7. 研究過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化

整個(gè)研究過(guò)程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因素外，其他各種因素導(dǎo)致

的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動(dòng)都應(yīng)控制。

試驗(yàn)工作應(yīng)在 I 期臨床試驗(yàn)觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。

受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)及時(shí)處理和記錄，必要時(shí)停止試驗(yàn)。

（三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

1. 數(shù)據(jù)表達(dá)

BA 和 BE 研究必須提供所有受試者各個(gè)時(shí)間點(diǎn)受試制劑和參比制劑的

藥物濃度測(cè)定數(shù)據(jù)、每一時(shí)間點(diǎn)的平均濃度（Mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD），提供每個(gè)受試者的濃度—時(shí)間曲線（C-T 曲線）和平

均 C-T 曲線以及 C-T 曲線各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。

脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。

2. 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

2.1 單次給藥的 BA 和 BE 研究，提供所有受試者服用受試制劑和參比

制劑的 AUC_0→t，AUC_{0→∞、}Cmax、Tmax、t_1/2、CL、Vd、 F 等參數(shù)及其平

均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

Cmax 和 Tmax 均以實(shí)測(cè)值表示。AUC_0→t 以梯形法計(jì)算；AUC_0→∞按公

式計(jì)算：AUC_0→∞＝AUC_0→t＋C_t/λ _z（t 為最后一次可實(shí)測(cè)血藥濃度的采樣時(shí)

間；C_t 為末次可測(cè)定樣本藥物濃度；λ _z 系對(duì)數(shù)濃度-時(shí)間曲線末端直線部份

求得的末端消除速率常數(shù)，可用對(duì)數(shù)濃度-時(shí)間曲線末端直線部分的斜率求

得；t_1/2 用公式 t_1/2＝0.693／λ z 計(jì)算。

以各個(gè)受試者受試制劑（T）和參比制劑（R）的 AUC_0→t 按下式分別計(jì)

算其相對(duì)生物利用度（F）值：

當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時(shí)：F＝AUC_T／AUC_R×100％

受試制劑和參比制劑劑量不同時(shí)，若受試藥物具備線性藥代動(dòng)力學(xué)特

征，可按下式以劑量予以校正：F＝【AUC_T×D_R／AUC_R×D_T】 ×100％

（AUC_T、AUC_R 分別為 T 和 R 的 AUC；D_R、D_T 分別為 T 和 R 的劑量）.

3.2.2 對(duì)于多次給藥的 BA 和 BE 研究，提供受試制劑和參比制劑的三

次谷濃度數(shù)據(jù)（Cmin），達(dá)穩(wěn)態(tài)后的 AUC_ss C_ss-max、C_ss-min 、T _ss-max、t_1/2  、

F、DF 等參數(shù)。當(dāng)受試制劑與參比制劑劑量相等時(shí)，F 值按下式計(jì)算：

F＝AUC_{ss T}／AUC_{ss R}×100％（式中 AUC_{ss T} 和 AUC_{ss R} 分別為 T 和 R 穩(wěn)

態(tài)條件下的 AUC）

3. 統(tǒng)計(jì)分析

3.1 對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換

評(píng)價(jià) BE 的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) AUC_0→t 和 Cmax 在進(jìn)行等效性檢驗(yàn)前必須

作對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。當(dāng)數(shù)據(jù)有偏倚時(shí)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換可校正其對(duì)稱性。此外,統(tǒng)計(jì)中數(shù)

據(jù)對(duì)比宜用比值法而不用差值法,通過(guò)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,可實(shí)現(xiàn)將均值之比置信區(qū)

間轉(zhuǎn)換為對(duì)數(shù)形式的均值之差的計(jì)算。

3.2 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)前普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用雙單側(cè) t 檢驗(yàn)和計(jì)算 90％置信區(qū)間的

統(tǒng)計(jì)分析方法來(lái)評(píng)價(jià)和判斷藥物間的生物等效性。

方差檢驗(yàn)是顯著性檢驗(yàn)，設(shè)定的無(wú)效假設(shè)是兩藥無(wú)差異，檢驗(yàn)方式為是與否，在 P<0.05 時(shí)認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計(jì)意義，但不一定不等效；P>0.05

時(shí)認(rèn)為兩藥差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義，但 P>0.05 并不能認(rèn)為兩者相等或相近。在生物利用度試驗(yàn)中，采用多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以判斷藥物制劑間、個(gè)體間、周期間和服藥順序間的差異。在生物等效性實(shí)驗(yàn)中，方差分析可提示誤差來(lái)源，為雙單側(cè) t 檢驗(yàn)計(jì)算提供了誤差值（MSE）。

雙單側(cè) t 檢驗(yàn)及（1－2α ）%置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗(yàn)的唯一標(biāo)準(zhǔn)。雙向單側(cè) t 檢驗(yàn)是等效性檢驗(yàn)，設(shè)定的無(wú)效假設(shè)是兩藥不等效，受試制劑在參比制劑一定范圍之外，在 P<0.05 時(shí)說(shuō)明受試制劑沒(méi)有超過(guò)規(guī)定的參比制劑的高限和低限，拒絕無(wú)效假設(shè)，可認(rèn)為兩藥等效。（1－2α ）%置

信區(qū)間是雙單側(cè) t 檢驗(yàn)另一種表達(dá)方式。其基本原理是在高、低 2 個(gè)方向?qū)κ茉囍苿┑膮��?shù)均值與高低界值之間的差異分別作單側(cè) t 檢驗(yàn)，若受試制劑均數(shù)在高方向沒(méi)有大于等于參比制劑均數(shù)的 125％（P＜0.05），且在低方向也沒(méi)有小于等于參比制劑均數(shù)的 80％（P＜0.05），即在兩個(gè)方向的單側(cè) t 檢驗(yàn)，都能以 95％的置信區(qū)間確認(rèn)沒(méi)有超出規(guī)定范圍，則可認(rèn)為受試制劑與參比制劑生物等效。

等效判斷標(biāo)準(zhǔn)，一般規(guī)定，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的 AUC_0→t 在參比制劑的 80％-125％范圍，受試制劑的 Cmax 在參比制劑的 70％-143％范圍 。根據(jù)雙單側(cè)檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)量，同時(shí)求得（1－2α ）%置信區(qū)間，如在規(guī)定范圍內(nèi)，即可有 1－2α 的概率判斷兩藥生物等效。

如有必要時(shí)，應(yīng)對(duì) Tmax 經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)，如無(wú)差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。

4. 群體生物等效性和個(gè)體生物等效性

目前均采用平均生物等效性（Average Bioequivalence ,ABE）評(píng)價(jià)方法，

藥物生物等效性的統(tǒng)計(jì)推斷是以受試制劑和參比制劑生物利用度參數(shù)平均

值為考察指標(biāo)的,從他們的樣本均數(shù)推斷總體均數(shù)是否等效。由于平均生物

等效性只考慮參數(shù)平均值,未考慮變異及分布,不能保證個(gè)體間生物利用度

相近,對(duì)低變異和高變異藥物設(shè)置的生物等效性標(biāo)準(zhǔn)一樣。因此也有提出群

體等效性（Population Bioequivalence, PBE）和個(gè)體生物等效性（Individual

Bioequivalence,IBE）的概念。

PBE 評(píng)價(jià)的目的是為了獲得某仿制藥應(yīng)用于人群的效果，不但要對(duì)被

比較制劑均值的差別進(jìn)行檢驗(yàn)，還要比較被比較制劑的群體變異。IBE 評(píng)

價(jià)除了比較均值的差別，還要比較個(gè)體內(nèi)變異、個(gè)體和制劑間的交互作用，

從而判斷患者換用其它藥物后是否合適。

因?yàn)槟壳皩?duì) PBE 和 IBE 評(píng)價(jià)方法經(jīng)驗(yàn)有限，而且目前大多數(shù)藥物運(yùn)用

ABE 評(píng)價(jià)方法可以滿足要求，因此暫不對(duì)此提出要求。建議結(jié)合申報(bào)品種

考慮，參照相關(guān)文獻(xiàn)選擇適宜的評(píng)價(jià)方法。

（四）結(jié)果評(píng)價(jià)

生物等效性是指一種藥物的不同制劑在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，給予相同

劑量，其吸收程度和吸收速度沒(méi)有明顯差異。故對(duì)受試制劑與參比制劑的

生物等效性評(píng)價(jià)，應(yīng)從藥物吸收程度和吸收速度兩方面進(jìn)行，評(píng)價(jià)反映這

兩方面的 3 個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)即 AUC_0→t、Cmax 和 Tmax 是否符合前述等

效標(biāo)準(zhǔn)。

目前比較肯定 AUC 對(duì)藥物吸收程度的衡量作用，而 Cmax、Tmax 依賴

取樣時(shí)間的安排，用它們衡量吸收速率有時(shí)是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具

有多峰現(xiàn)象的制劑及個(gè)體變異大的實(shí)驗(yàn)。故在評(píng)價(jià)時(shí)，若出現(xiàn)某些不等效

特殊情況，需具體問(wèn)題加以具體分析。

對(duì)于 AUC，一般要求 90％可信區(qū)間在 80％－125％范圍內(nèi)。對(duì)于治療

窗窄的藥物，這個(gè)范圍可能應(yīng)適當(dāng)縮小，而在極少數(shù)情況下，如果經(jīng)臨床

證實(shí)合理的情況下，也可以適當(dāng)放寬范圍。對(duì) Cmax 也是如此。而對(duì)于 Tmax，

一般在釋放快慢與臨床療效和安全性密切相關(guān)時(shí)需要統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)，其等效范

圍可根據(jù)臨床要求來(lái)確定。

對(duì)于出現(xiàn)受試制劑生物利用度高于參比制劑的情況，即所謂超生物利用

度（Suprabioavailability），可以考慮兩種情況：1）參比制劑是否本身生物利用

度低的產(chǎn)品，因而受試制劑表現(xiàn)出生物利用度相對(duì)較高；2）參比制劑質(zhì)量符

合要求，受試制劑確實(shí)超生物利用度。

結(jié)果的評(píng)價(jià)應(yīng)結(jié)合研究目的出發(fā)，進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)的目的提供兩

制劑可替換使用的依據(jù)；進(jìn)行生物利用度研究，則主要分析獲得的相對(duì)生

物利用度數(shù)值進(jìn)一步指導(dǎo)確定新劑型的臨床使用劑量。

（五）臨床報(bào)告內(nèi)容

為了滿足評(píng)價(jià)的需求，一份生物等效性研究臨床報(bào)告內(nèi)容至少應(yīng)包括

以下內(nèi)容（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康�；�?/span>2）生物樣本分析方法的建立和考察的數(shù)據(jù)，提

供必要的圖譜；（3）詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作方法，包括全部受試者的資料、

樣本例數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時(shí)間安排；（4）原始測(cè)

定未知樣品濃度全部數(shù)據(jù)，每個(gè)受試者藥代參數(shù)和藥時(shí)曲線；（5）采用的

數(shù)據(jù)處理程序和統(tǒng)計(jì)分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計(jì)過(guò)程和結(jié)果；（6）服藥后的臨

 床不良反應(yīng)觀察結(jié)果，受試者中途退出和脫落記錄及原因；（7）生物利用

度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（8）參考文獻(xiàn)。正文前應(yīng)有簡(jiǎn)短摘要；

正文末，應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)單位、研究負(fù)責(zé)人、參加實(shí)驗(yàn)人員，并簽名蓋章，以

示對(duì)研究結(jié)果負(fù)責(zé)。

五、特殊制劑

以上研究方法主要針對(duì)普通口服制劑，在某些特殊劑型要求可能不同：

（一）口服緩（控）釋制劑

緩（控）釋制劑因?yàn)椴捎昧诵录夹g(shù)改變了其體內(nèi)釋放吸收過(guò)程，因此

必須進(jìn)行生物利用度比較研究以證實(shí)其緩（控）釋特征，但在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和

評(píng)價(jià)時(shí)與普通制劑都有不同。一般要求應(yīng)在單次給藥和多次給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)兩

種條件下進(jìn)行。由于緩（控）釋制劑釋放時(shí)間長(zhǎng)，可能受食物影響大，因

此必要時(shí)還應(yīng)考慮食物對(duì)吸收的影響。

1. 單次給藥試驗(yàn)旨在比較受試者于空腹?fàn)顟B(tài)下服用緩（控）釋受試制

劑與參比制劑的吸收速度和吸收程度的生物等效性，確認(rèn)受試制劑的緩

（控）釋藥代動(dòng)力學(xué)特征。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本同普通制劑，給藥方式應(yīng)與臨床推

薦用法用量一致。

1.1 參比制劑：若國(guó)內(nèi)已有相同產(chǎn)品上市，應(yīng)選用該緩（控）釋制劑相同的國(guó)內(nèi)上市的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑；若系創(chuàng)新的緩（控）釋制劑，則以該藥物已上市同類普通制劑的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑。

1.2 應(yīng)提供藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)：

同樣應(yīng)提供（1）各受試者受試制劑與參比制劑的不同時(shí)間點(diǎn)生物樣品

藥物濃度，以列表和曲線圖表示；（2）計(jì)算各受試者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并

計(jì)算均值與標(biāo)準(zhǔn)差：AUC_0→t、AUC_0→∞、Cmax、Tmax、F 值，并盡可能提

供其它參數(shù)如平均滯留時(shí)間（MRT）等體現(xiàn)緩（控）釋特征的指標(biāo)。

1.3 結(jié)果評(píng)價(jià)：

緩（控）釋受試制劑單次給藥的相對(duì)生物利用度估算同普通制劑。如

緩（控）釋受試制劑與緩（控）釋參比制劑比較，如 AUC、Cmax、Tmax

均符合生物等效性統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可認(rèn)定兩制劑于單次給藥條件下生物等效；

若緩（控）釋受試制劑與普通制劑比較，一般要求 AUC 不低于普通制劑 80%，

而 Cmax 明顯降低，Tmax 明顯延遲，即顯示該制劑具緩釋或控釋動(dòng)力學(xué)特

征。

2. 多次給藥試驗(yàn)旨在比較受試制劑與參比制劑多次連續(xù)用藥達(dá)穩(wěn)態(tài)

時(shí)，藥物的吸收程度、穩(wěn)態(tài)血藥濃度和波動(dòng)情況。

2.1 給藥方法：按臨床推薦的給藥方案連續(xù)服藥的時(shí)間達(dá) 7 個(gè)消除半

衰期后，通過(guò)連續(xù)測(cè)定至少 3 次谷濃度（谷濃度采樣時(shí)間應(yīng)安排在不同日

的同一時(shí)間內(nèi)），以證實(shí)受試者血藥濃度已達(dá)穩(wěn)態(tài)。達(dá)穩(wěn)態(tài)后參照單次給藥

采樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)，測(cè)定末次給藥完整血藥濃度-時(shí)間曲線。

以普通制劑為參比時(shí)，普通制劑與緩（控）釋制劑應(yīng)分別按推薦臨床

用藥方法給藥（例如普通制劑每日 2 次，緩（控）釋制劑每日 1 次），達(dá)到

穩(wěn)態(tài)后，緩（控）釋制劑選末次給藥，參照單次給藥采樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)，然

后計(jì)算各參數(shù)，而普通制劑仍按臨床用法給藥，按 2 次給藥的藥時(shí)曲線確

定采樣時(shí)間點(diǎn)，測(cè)得 AUC 是實(shí)際 2 次給藥后的總和，穩(wěn)態(tài)峰濃度、達(dá)峰時(shí)

間及谷濃度可用 2 次給藥的平均值。如用劑量調(diào)整公式計(jì)算 AUC（如以 1

次給藥 AUC 的 2 倍計(jì)），將會(huì)使測(cè)得的 AUC 值不能準(zhǔn)確反映實(shí)際 AUC 值。

2.2 應(yīng)提供的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與數(shù)據(jù)：

（1）各受試者緩（控）釋受試制劑與參比制劑不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度

數(shù)據(jù)以及均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差；

（2）各受試者末次給藥前至少連續(xù) 3 次測(cè)定的谷濃度（Cmin）；

（3）各受試者在血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線。穩(wěn)

態(tài)峰濃度（C_ss-max）、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）及谷濃度（C _ss-min）的實(shí)測(cè)值。并

計(jì)算末次劑量服藥前與達(dá) τ 時(shí)間點(diǎn)實(shí)測(cè) C_ss-min 的平均值；

（4）各受試者的穩(wěn)態(tài)藥時(shí)曲線下面積（AUC_ss）、平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度（C_av）。

C_av＝AUC_ss／τ ，式中 AUC_ss 系穩(wěn)態(tài)條件下用藥間隔期 0－τ 時(shí)間的 AUC，

τ 是用藥間隔時(shí)間；

（5）各受試者血藥濃度波動(dòng)度（DF_ss）。

DF＝（Cmax-Cmin）/C_av×100％

2.3 結(jié)果評(píng)價(jià)：一般同緩（控）釋制劑的單次給藥試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)。

當(dāng)緩釋制劑與普通制劑比較時(shí)，對(duì)于波動(dòng)系數(shù)的評(píng)價(jià)，應(yīng)結(jié)合緩釋制

劑本身的特點(diǎn)具體分析。

另外，對(duì)于不同的緩（控）釋劑型，如結(jié)腸定位片、延遲釋放片等，

還應(yīng)當(dāng)考慮劑型的特殊性來(lái)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，增加相應(yīng)考察指標(biāo)以體現(xiàn)劑型特點(diǎn)。

（二）特殊活性成分制劑

如活性成分為蛋白質(zhì)多肽、激素、維生素、電解質(zhì)等，因?yàn)榇嬖趦?nèi)源

性物質(zhì)干擾問(wèn)題以及體內(nèi)降解問(wèn)題，所以生物樣本分析方法的確定是其重

點(diǎn)。同樣建議參照國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)針對(duì)自身品種考慮。

（三）復(fù)方制劑

對(duì)復(fù)方化學(xué)藥品制劑生物等效性研究，一般情況下某一成分的體內(nèi)行

為不能說(shuō)明其它成分的體內(nèi)行為，故原則上應(yīng)證實(shí)每一個(gè)有效成分的生物

等效性。試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)盡量兼顧各個(gè)成分的特點(diǎn)。

六、結(jié)語(yǔ)

生物利用度和生物等效性研究只是作為一個(gè)驗(yàn)證制劑質(zhì)量的方法學(xué)手

段。受試制劑能否達(dá)到預(yù)期的生物利用度，受試制劑是否能達(dá)到與原創(chuàng)制

劑或其他已經(jīng)過(guò)臨床試驗(yàn)證明了安全與有效藥物的生物等效，都應(yīng)該從最

開(kāi)始的處方篩選、生產(chǎn)工藝條件以及質(zhì)量研究等方面著手，盡可能分析原

創(chuàng)制劑或參比制劑的有關(guān)文獻(xiàn)，以實(shí)現(xiàn)研究目的。

七、名詞解釋

介質(zhì)效應(yīng):由于樣品中存在干擾物質(zhì),對(duì)響應(yīng)造成的直接或間接的影響。

標(biāo)準(zhǔn)樣品(Standard Sample)：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣

品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。

質(zhì)控樣品（Quality Control Sample）：質(zhì)控樣品系將已知量的待測(cè)藥物加

入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測(cè)生物分析方法的效能和評(píng)價(jià)每一分

析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。一般配制高、中、低三個(gè)濃

度的質(zhì)控樣品。

分析批（Analytical run/batch）：包括待測(cè)樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和

質(zhì)控樣品的完整系列。由于儀器性能的改善和自動(dòng)進(jìn)樣器的使用，一天內(nèi)

可以完成幾個(gè)分析批，一個(gè)分析批也可以持續(xù)幾天完成，但連續(xù)測(cè)量不宜超過(guò) 3 天。高溶解度（Highly soluble）：若藥物的

最大劑量能溶解在 250ml 或更少的 pH1-7.5 的水溶液中，此藥物可被認(rèn)為是高溶解度的藥物。250 ml 的量來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)的生物等效

性研究中受試者用于服藥的一杯水的量。

高滲透性（Highly permeable）：滲透性的分類標(biāo)準(zhǔn)以藥物在人體內(nèi)的吸收程度（吸收劑量的分?jǐn)?shù)，而不是系統(tǒng)生物利用

度）為間接依據(jù)，以測(cè)定通透人體腸壁膜的量為直接依據(jù)。也可以選用能充分描述人體內(nèi)的吸收程度（如體外上皮

組織細(xì)胞培養(yǎng)法）的非人體系統(tǒng)。若沒(méi)有資料證明藥物在胃腸道內(nèi)是不穩(wěn)定的，以質(zhì)量平衡測(cè)定法為依據(jù)，同靜脈

注射給藥相比較為依據(jù)，當(dāng)藥物的吸收程度達(dá)到 90%時(shí)，此藥物可被認(rèn)為是高滲透性的。快速溶出（Rapidly dissolving）:

利用規(guī)定的第一法裝置 100rpm(或二法裝置 50rpm)，使用 900 ml 或少于 900 ml 的下列每種介質(zhì)測(cè)定溶出度：

1）0.1mol/L HCl 或符合藥典規(guī)定的無(wú)酶人工胃液；

2）PH 4.5 的緩沖液；

3）PH 6.8 的緩沖液或符合藥典規(guī)定的無(wú)酶人工腸液。

在上述條件下，若一個(gè)口服制劑在 30 分鐘內(nèi)其標(biāo)示量的 85%以上完全

溶出，則此藥物被認(rèn)為是快速溶出的。

高變異性藥物（Highly variable drug）：當(dāng)某一藥物的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)（以

AUC 或 Cmax 計(jì)算的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)）大于或等于 30%時(shí)，稱之為高變異

藥物。這種變異的增加使得對(duì)樣本例數(shù)可能要求增加。

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九、著者

《化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題

研究組