一、概述

生物等效性（Bioequivalence, BE）研究是比較受試制劑（T）與參比制劑（R）的吸收速度和吸收程度差異是否在可接受范圍內(nèi)的研究，可用于化學(xué)藥物仿制藥的上市申請(qǐng)，也可用于已上市藥物的變更（如新增規(guī)格、新增劑型、新的給藥途徑）申請(qǐng)。

目前生物等效性研究通常推薦使用平均生物等效性（Average Bioequivalence, ABE）方法。平均生物等效性方法只比較藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的平均水平，未考慮個(gè)體內(nèi)變異及個(gè)體與制劑的交互作用引起的變異。在某些情況下，可能需要考慮其他分析方法。例如氣霧劑的體外BE研究可采用群體生物等效性（Population Bioequivalence，PBE）方法，以評(píng)價(jià)制劑間藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的平均水平及個(gè)體內(nèi)變異是否等效。

本指導(dǎo)原則旨在為以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的生物等效性研究的研究設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)分析和結(jié)果報(bào)告提供技術(shù)指導(dǎo)，是對(duì)生物等效性研究數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的一般原則。在開展生物等效性研究時(shí)，除參考本指導(dǎo)原則的內(nèi)容外，尚應(yīng)綜合參考《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥物臨床試驗(yàn)的生物統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)原則》等相關(guān)指導(dǎo)原則。

二、研究設(shè)計(jì)

（一）總體設(shè)計(jì)考慮

生物等效性研究可采用交叉設(shè)計(jì)或者平行組設(shè)計(jì)。

1.交叉設(shè)計(jì)

生物等效性研究一般建議采用交叉設(shè)計(jì)的方法。交叉設(shè)計(jì)的優(yōu)勢(shì)包括：可以有效減少個(gè)體間變異給試驗(yàn)評(píng)價(jià)帶來(lái)的偏倚；在樣本量相等的情況下，使用交叉設(shè)計(jì)比平行組設(shè)計(jì)具有更高的檢驗(yàn)效能。

兩制劑、兩周期、兩序列交叉設(shè)計(jì)是一種常見的交叉設(shè)計(jì)，見表1。

表1  兩制劑、兩周期、兩序列交叉設(shè)計(jì)

如果需要準(zhǔn)確估計(jì)某一制劑的個(gè)體內(nèi)變異，可采用重復(fù)交叉設(shè)計(jì)。重復(fù)交叉設(shè)計(jì)包括部分重復(fù)（如兩制劑、三周期、三序列）或者完全重復(fù)（如兩制劑、四周期、兩序列），見表2和表3。

表2  兩制劑、三周期、三序列重復(fù)交叉設(shè)計(jì)

表3  兩制劑、四周期、兩序列重復(fù)交叉設(shè)計(jì)

2.平行組設(shè)計(jì)

在某些特定情況下（例如半衰期較長(zhǎng)的藥物），也可以使用平行組設(shè)計(jì)。平行組設(shè)計(jì)因個(gè)體間變異給試驗(yàn)帶來(lái)的影響較交叉設(shè)計(jì)大，應(yīng)有更嚴(yán)格的受試者入選條件，如年齡、性別、體重、疾病史等，且需使用合理的隨機(jī)化方案確保組間的基線水平均衡以得到更好的組間可比性。

3.其他設(shè)計(jì)

如果采用適應(yīng)性設(shè)計(jì)等其他設(shè)計(jì)方法，可參考《藥物臨床試驗(yàn)的生物統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)原則》，且應(yīng)事先與監(jiān)管機(jī)構(gòu)溝通。

（二）樣本量

試驗(yàn)前需充分估計(jì)所需的樣本量，以保證足夠的檢驗(yàn)效能，并在試驗(yàn)方案中詳細(xì)說(shuō)明樣本量估計(jì)方法和結(jié)果。使用ABE方法進(jìn)行生物等效性分析時(shí)，應(yīng)基于明確的公式合理估計(jì)樣本量。不同的設(shè)計(jì)，對(duì)應(yīng)的樣本量估計(jì)公式不同。

交叉設(shè)計(jì)的樣本量需考慮的因素包括：（1）檢驗(yàn)水準(zhǔn)α，通常為雙側(cè)0.1（雙單側(cè)0.05）；（2）檢驗(yàn)效能1-β，通常至少為80%；（3）個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)（Within-subject coefficient of variation，CV_w%），可基于文獻(xiàn)報(bào)道或預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行估計(jì)；（4）幾何均值比（Geometric mean ratio, GMR）；（5）等效性界值。平行組設(shè)計(jì)的樣本量估計(jì)可參考一般連續(xù)型變量的樣本量計(jì)算公式。

如果使用的分析方法沒有明確的樣本量計(jì)算公式，也可以采用計(jì)算機(jī)模擬的方法估計(jì)樣本量。

（三）受試者脫落

為了避免研究過(guò)程中因受試者的脫落導(dǎo)致樣本量不足，申請(qǐng)人在進(jìn)行樣本量估計(jì)時(shí)應(yīng)考慮適當(dāng)增加樣本量。

一般情況下，試驗(yàn)開始后不應(yīng)再追加受試者。已分配隨機(jī)號(hào)的受試者通常不可以被替代。

（四）殘留效應(yīng)

使用交叉設(shè)計(jì)進(jìn)行BE研究通過(guò)每個(gè)受試者自身對(duì)照來(lái)增加比較的精度，其基本假設(shè)是所比較的制劑在下一周期試驗(yàn)時(shí)均不存在殘留效應(yīng)，或殘留效應(yīng)相近。如果交叉設(shè)計(jì)中存在不相等的殘留效應(yīng)，那么對(duì)于GMR的估計(jì)可能有偏。

研究設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)避免發(fā)生殘留效應(yīng)。如果發(fā)現(xiàn)存在殘留效應(yīng)，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)分析產(chǎn)生的可能原因，提供相應(yīng)的判斷依據(jù)，評(píng)估其對(duì)最終結(jié)論的影響。

三、數(shù)據(jù)處理和分析

（一）數(shù)據(jù)集

數(shù)據(jù)集事先需要在方案中明確定義，包括具體的受試者剔除標(biāo)準(zhǔn)。一般情況下，BE研究的數(shù)據(jù)集應(yīng)至少包括藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)集（Pharmacokinetics Parameter Set，PKPS）、生物等效性集（Bioequivalence Set，BES）。用于不同藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析的受試者數(shù)量可能不同。

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)集（PKPS）：包括接受過(guò)至少一次研究藥物的受試者中獲得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)數(shù)據(jù)集。本數(shù)據(jù)集的作用在于描述性統(tǒng)計(jì)受試者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)數(shù)據(jù)。

生物等效性集（BES）：通常包括至少一個(gè)周期且具有至少一個(gè)可評(píng)價(jià)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析集。本數(shù)據(jù)集是推斷受試制劑和參比制劑是否生物等效的主要數(shù)據(jù)集。

（二）數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換

建議對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（如AUC和C_max）使用自然對(duì)數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換。選擇的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換方式應(yīng)在試驗(yàn)過(guò)程中保持一致，且需在方案中指明。在生物等效性研究中，由于樣本量較少，難以確定數(shù)據(jù)的分布。因此，不建議以對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，或原始數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布為由，而使用原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

（三）統(tǒng)計(jì)假設(shè)與推斷

平均生物等效要求受試制劑和參比制劑的差異在一定可接受范圍內(nèi)，通過(guò)以下假設(shè)檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。

原假設(shè)H₀：或

備擇假設(shè)H₁：

其中μ_T為受試制劑對(duì)數(shù)變換后藥代參數(shù)總體均數(shù)，μ_R為參比制劑對(duì)數(shù)變換后藥代參數(shù)總體均數(shù)，θ為生物等效性界值。在設(shè)定的檢驗(yàn)水準(zhǔn)下，若拒絕原假設(shè)H₀，則表明生物等效。通常設(shè)定θ=ln（1.25），-θ=ln（0.8），即生物等效性要求受試制劑和參比制劑的GMR落在80.00%—125.00%范圍內(nèi)。

生物等效性標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)同時(shí)適用于各主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞。

通常情況下，如果研究藥物包含多個(gè)組分，則每個(gè)組分均應(yīng)符合生物等效性標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)T_max與藥物的臨床療效密切相關(guān)時(shí)，通常采用配對(duì)非參數(shù)方法對(duì)T_max進(jìn)行差異性檢驗(yàn)。

（四）數(shù)據(jù)分析

1.概述

對(duì)于上文提到的生物等效性標(biāo)準(zhǔn)，通常是構(gòu)建的雙側(cè)90%置信區(qū)間，若此置信區(qū)間落在區(qū)間內(nèi)，則可推斷受試制劑和參比制劑滿足生物等效。此方法等價(jià)于在0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)下進(jìn)行雙單側(cè)假設(shè)檢驗(yàn)。應(yīng)根據(jù)不同的試驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇恰當(dāng)的置信區(qū)間計(jì)算方法。計(jì)算出的雙側(cè)90%置信區(qū)間后，可通過(guò)逆對(duì)數(shù)變換（指數(shù)變換）得到受試制劑和參比制劑原始數(shù)據(jù)的GMR的雙側(cè)90%置信區(qū)間。

2.交叉設(shè)計(jì)

對(duì)于交叉設(shè)計(jì)，建議使用線性混合效應(yīng)模型進(jìn)行分析計(jì)算。

3.平行組設(shè)計(jì)

建議采用基于正態(tài)分布均數(shù)差值的置信區(qū)間構(gòu)建方法。

（五）離群數(shù)據(jù)處理

通常不建議剔除離群值。必要時(shí)需要針對(duì)離群值進(jìn)行敏感性分析，即評(píng)價(jià)剔除和不剔除離群值對(duì)生物等效性結(jié)果的影響。如果結(jié)論不一致，需解釋說(shuō)明并分析原因。

（六）其他問(wèn)題

如果一個(gè)交叉設(shè)計(jì)是在兩個(gè)及以上的中心進(jìn)行，統(tǒng)計(jì)模型中應(yīng)該考慮中心效應(yīng)。所用模型應(yīng)該能估計(jì)不同中心的效應(yīng)，反映不同中心的實(shí)際情況，并說(shuō)明來(lái)自不同中心的試驗(yàn)數(shù)據(jù)是否可以合并進(jìn)行分析。

如果存在多種受試制劑和/或多種參比制劑，通常會(huì)有多個(gè)生物等效的假設(shè)檢驗(yàn)。若多個(gè)假設(shè)檢驗(yàn)需同時(shí)滿足，則無(wú)需進(jìn)行I類錯(cuò)誤的調(diào)整；若不要求同時(shí)滿足，則需對(duì)I類錯(cuò)誤進(jìn)行調(diào)整，調(diào)整的方法有Bonferroni法、Hochberg法等。

四、結(jié)果報(bào)告

結(jié)果報(bào)告中應(yīng)對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（一）隨機(jī)化

應(yīng)具體說(shuō)明試驗(yàn)用的隨機(jī)化系統(tǒng)和隨機(jī)化方案，包括隨機(jī)化控制的因素、區(qū)組、種子數(shù)等，并附有隨機(jī)化數(shù)字表。

隨機(jī)化的結(jié)果應(yīng)用表格描述，其中包含受試者編號(hào)、每一周期的用藥情況，以及隨機(jī)化控制的因素等。隨機(jī)化結(jié)果可在附錄中展現(xiàn)。

（二）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)說(shuō)明所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，包括藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算方法、分析模型和等效性檢驗(yàn)方法、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換等內(nèi)容。還需說(shuō)明使用軟件的名稱與版本號(hào)。

（三）統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

應(yīng)提供每個(gè)受試者給藥后的檢測(cè)成分濃度檢測(cè)結(jié)果。在附錄中應(yīng)同時(shí)給出算術(shù)坐標(biāo)以及對(duì)數(shù)坐標(biāo)下每個(gè)受試者給藥后的藥時(shí)曲線、不同藥物制劑的平均藥時(shí)曲線。

應(yīng)提供每個(gè)受試者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果，包括受試制劑和參比制劑的算術(shù)均值、幾何均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

應(yīng)提供包含序列內(nèi)嵌套受試者、序列、周期和制劑因素的混合效應(yīng)模型結(jié)果。若存在其他還需考慮的因素，也應(yīng)包含在模型中。

應(yīng)提供藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)幾何均值比及其置信區(qū)間估計(jì)結(jié)果。

五、數(shù)據(jù)管理

以注冊(cè)上市為目的的生物等效性研究的數(shù)據(jù)管理可參考臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)管理相關(guān)技術(shù)要求。

生物等效性研究中生物樣本分析等數(shù)據(jù)為外部數(shù)據(jù)，在樣本分析及相關(guān)數(shù)據(jù)傳輸過(guò)程中應(yīng)保持盲態(tài)，并按照提前制定的傳輸協(xié)議進(jìn)行數(shù)據(jù)傳輸。試驗(yàn)涉及到的生物樣本分析、數(shù)據(jù)傳輸和統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)的計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證并保持驗(yàn)證狀態(tài)。

六、參考文獻(xiàn)

1.CFDA：以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則. 2016年3月.

2.CFDA：藥物臨床試驗(yàn)的生物統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)原則. 2016年6月.

3.FDA：Guidance for Industry: Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence. Jan 2001.

4.EMA：Guideline on the Investigation of Bioequivalence. Aug 2010.

5.EMA：Questions & Answers: Positions on Specific Questions Addressed to the Pharmacokinetics Working Party. Nov 2015.

七、術(shù)語(yǔ)表